生物緩沖劑在生物化學(xué)研究中有著重要的意義,在免疫印跡、生物芯片及生物雜交等實驗及體外診斷、生物醫(yī)藥等行業(yè)中的應(yīng)用非常廣泛。
生物緩沖劑系統(tǒng)包含幾十個品種。典型品種如注射級氨丁三醇、HEPES等。本文將介紹其中最常見的品種——注射級氨丁三醇緩沖劑的優(yōu)點及使用注意事項。
一、簡介:
注射級氨丁三醇是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域的緩沖鹽,全稱三(羥甲基)氨基甲烷,化學(xué)式C4H11NO3,白色結(jié)晶顆粒,CAS號:77-86-1,25°C下的pKa為8.06,常用于蛋白或核酸緩沖液,有效范圍通常是pH 7.0-9.2之間。
注射級氨丁三醇被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長,注射級氨丁三醇也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一,其在電泳緩沖液中與甘氨酸構(gòu)成緩沖體系,穩(wěn)定電泳過程中的pH。此外Tris還是制備表面活性劑、硫化促進劑和一些藥物的中間物,注射級氨丁三醇也被用作滴定標準物。
常見的注射級氨丁三醇緩沖液有Tris-HCl緩沖液、Tris-磷酸鹽緩沖液以及多種衍生緩沖液,如TBS、TE等。
二、注射級氨丁三醇緩沖液優(yōu)點如下:
1. Tris堿的堿性較強,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液,應(yīng)用范圍廣;
2. Tris緩沖液對生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀;
3. Tris在水中溶解度高,對很多酶的反應(yīng)是惰性的;
4. Tris緩沖能力高,在pH7.5-9.0之間有較強的緩沖能力;
5. Tris緩沖劑應(yīng)用廣泛,在生物化學(xué)、分子生物學(xué)、體外診斷、化妝品、涂料等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。
三、使用注射級氨丁三醇緩沖劑的注意事項:
1. Tris緩沖液的pH值受溫度影響大,△pKa/℃=-0.031 ,例如:4℃時緩沖液的pH=8.4,則37℃時的pH=7.4,所以一定要在使用溫度下進行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。
2. Tris緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1
3. Tris在一定程度上與各種分子反應(yīng),包括RNA酶抑制劑,醛,酶,DNA以及常見金屬如Cr3+,F(xiàn)e3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,在有些系統(tǒng)中會起抑制作用,在配制過程中需考慮與其他組分之間的相互作用;
4. Tris緩沖液易吸收空氣中的CO2,配制的緩沖液要注意蓋嚴密封;
5. Tris緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,需使用與注射級氨丁三醇溶液具有兼容性的電極;
6. Tris緩沖液不適用于二喹啉甲酸(BCA)測定;
7. 吸入,攝入,皮膚吸收注射級氨丁三醇可造成傷害,操作時需戴好手套和護目鏡;
8. 作為蛋白緩沖液時,若后續(xù)工作需要質(zhì)譜,則不適宜用注射級氨丁三醇,最好換成其他質(zhì)譜儀可耐受的緩沖液。
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