上篇講到脂質體輔料總覽，磷脂類的輔料種類很多，我們將在后面的篇章具體描述。實際上脂質體的關鍵輔料只有兩類，磷脂類和膽固醇。制備脂質體，膽固醇是不可少的輔料，除了溫敏脂質體，為了降低相變溫度時脂質體的穩(wěn)定性，迅速釋放藥物，可不添加膽固醇。本篇主要介紹膽固醇的理化性質，制造及應用。

1.脂質體制劑，為什么膽固醇不可少

膽固醇屬于兩親物質，同時具有親油和親水兩種基團，但是其親油性較親水性強，與磷脂相互作用形成脂質體時可嵌入到磷脂分子之間，調節(jié)膜結構及性質，提高脂質體功能性。此外，還可調節(jié)磷脂雙分子層膜的流動性，使膜通透性降低，減少藥物滲漏；可使脂膜維持一定柔韌性，增強脂質體囊泡抗擊外部條件變化的能力；還能對磷脂的氧化有一定保護作用。膽固醇對磷脂的相變具有雙相調節(jié)作用。在相變溫度以上時，膽固醇可抑制磷脂分子中脂肪酸烴鏈的旋轉異構化運動，減少歪扭構象數量，從而降低膜的流動性；在相變溫度以下時，膽固醇又可誘發(fā)磷脂分子的脂肪酸烴鏈產生歪扭構象變化，從而阻止膠晶態(tài)出現(xiàn)，減少剛性，增加柔韌性。膽固醇又有類似增塑劑樣作用。在脂質體載體中提高膽固醇的比例可增加脂質體的穩(wěn)定性，降低滲漏率。有報道，在制備脂質體時添加30-50%的膽固醇，可以提高脂質體的載藥量和穩(wěn)定性。所以在脂質體中膽固醇不可少。

2.膽固醇的理化性質

早在18世紀人們已從膽石中發(fā)現(xiàn)了膽固醇，1816年化學家本歇爾將這種具脂類性質的物質命名為膽固醇。膽固醇是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。膽固醇為白色粉末狀固體，室溫下穩(wěn)定性較好，但對光敏感，因此應該避光、密封保存，保存得當，有效期可達5年。在三lv甲烷中易溶（1g/4.5ml），在yi醚中溶解（1g/2.8ml），在丙酮、乙酸乙酯或石油醚中略溶，在乙醇中微溶，在水中不溶（0.2mg/100ml）。

3.膽固醇的制造工藝

3.1動物組織提取

動物組織提取法是以新鮮動物內臟、骨髓及腦為原料，工藝為(1)濃縮提取:將豬牛羊腦子曬干粉碎放入浸泡罐提取,回收罐中回收,循環(huán)浸泡提取；(2)酸化:丙酮提取液濾出放入到反應罐中加入乙醇和硫酸加溫酸化；(3)皂化:酸化的膽固醇過濾放入反應罐內加入乙醇和氫氧化鈉加溫皂化; (4)清洗:皂化后的膽固醇放入反應罐中加熱,過濾,冷卻結晶。此類工藝簡單可行，是目前國內膽固醇的主要生產工藝，然而易受到原料供應的限制，且有殘留致病基因的可能。

3.2羊毛脂提取

羊毛油脂是羊毛工業(yè)的副產品，羊毛油脂中膽固醇含量較高，約10%至15%，且成品低廉來源豐富，穩(wěn)定性及安全性高，國外大部分膽固醇都是以羊毛脂為原料。但羊毛脂中的膽固醇多與羊毛脂酸結合以酯的形式存在，而且膽固醇類似物很多，所以要得到純品，對技術要求很高。通過皂化工藝使膽固醇游離出來，皂化得到的膽固醇還含有大量的脫氫膽固醇、二氫膽固醇等類似物，因分子結構相似，性質相近，給分離帶來困難，成為工藝難點和關鍵點。但是，隨著對藥品安全性的重視，羊毛脂來源的膽固醇必定會逐漸取代動物內臟來源的膽固醇。江西天新藥業(yè)最新申請制備工藝如下：

(1)將羊毛脂、氧化鈣、稀釋劑、水及相轉移催化劑混合，升溫進行皂化反應，獲得羊毛脂皂化產物；

 (2)從羊毛脂皂化產物中分離獲得羊毛脂醇；

 (3)在水、乙醇、有機溶劑的存在下，使羊毛脂醇與氯化鈣接觸獲得膽固醇氯化鈣絡合物；

 (4)將膽固醇氯化鈣絡合物進行解絡，固液分離獲得膽固醇粗品；

 (5)將膽固醇粗品與低級有機酸和低級醇混合溶劑混合，重結晶獲得膽固醇成品。

4.膽固醇應該怎么選擇

膽固醇可提高脂質體的穩(wěn)定性，是制備脂質體*的物質。膽固醇輔料如何挑選，必須是已通過關聯(lián)審評，注射級和高純度。

艾偉拓代理的膽固醇，為日本進口，純度高達99%，在國際上多個上市脂質體產品中長期應用。不同于大多數從動物內臟中提取膽固醇的工藝，艾偉拓供應的膽固醇采用的原料為羊毛脂，因此產品雜質相對較少，是脂質體研發(fā)和生產的*。DMF號:24780， EINECS號:200-353-2，備案登記號:F20170000106。

5.膽固醇在上市脂質體及工藝中的用法用量舉例

制備普通載藥脂質體，膽固醇(供注射用)是必須的添加物，用量一般為CHO:PC=0.3:1（摩爾比）。因PC和藥物的不同，存在膽固醇的最佳用量。在一定范圍內，脂質體的粒徑、氧化穩(wěn)定性、物理穩(wěn)定性與膽固醇添加量成正相關，超出范圍時，超過膜負荷，會造成部分脂質體破裂。另外，膽固醇的添加會對膜相變溫度有一定影響，臨界值以內使相變溫度降低，臨界值以上，使相變溫度升高。形成脂質體結構時，膽固醇嵌插在磷脂雙分子層上，因此可調節(jié)膜的流動性，作用隨溫度的不同而改變。在相變溫度以上，它能使磷脂的脂肪酸鏈運動性減弱，從而降低磷脂分子的流動性;而在相變溫度以下時，則可通過阻止磷脂脂肪酸鏈的相互作用，緩解低溫引起的磷脂分子流動性劇烈下降。

膽固醇已廣范應用于上市脂質體產品處方，并在多個臨床階段的脂質體項目中得以應用，如順鉑脂質體Lipoplatino ，多柔比星Doxil，兩性霉素 AmBisome，柔紅霉素DaunoXome，布卡因EXPAREL，維替泊芬Visudyne等。

膽固醇用法用量舉例如下：

5.1兩性霉素脂質體注射液(Ambisome，1990)

膽固醇用法:與磷脂和藥物一起溶于有機溶劑，旋蒸、抽真空制膜。用量：52mg/瓶

5.2多柔比星脂質體注射液(Doxil, 1995)

膽固醇用法:注入法，與磷脂一起溶于有機溶劑，快速攪拌條件下緩慢勻速注入適當濃度的硫酸銨溶液。用量：3.19 mg/mL

5.3布卡因脂質體注射液(Exparel, 2011)

膽固醇用法:與磷脂--起溶于有機溶劑，快速剪切條件下與含有布卡因的水溶液混合、乳化形成初乳。用量：8.2mg/ml

6.在近期國內脂質體研發(fā)中的磷脂與膽固醇比例

查閱了近期國內脂質體研發(fā)報道，摘錄制備工藝中磷脂與膽固醇比例舉例如下：

譚李玉等制備了杜鵑蘭酮脂質體,確定膽固醇與大豆磷脂質量比為1:8。

嵇晶等制備丹參總酚酸復合磷脂脂質體，磷脂與膽固醇質量比為3∶1。

屈曉梅等制備了舒馬普坦脂質體，卵磷脂/膽固醇比5.4:1,。

張璐等制備了紫杉醇五味子乙素脂質體，磷脂44 mg、膽固醇8 mg。

王溪淼制備卡培他濱與奧沙利鉑復方脂質體，磷脂與膽固醇之比為3:1。

邢宇等制備了銀杏內酯B脂質體， 160 mg蛋黃卵磷脂、40 mg膽固醇。

王成祥等制備了鹽酸阿霉素-黃芪甲苷脂質體，磷脂濃度為8 mg/mL,磷脂與膽固醇比為10∶1,藥脂比為1∶5。

呂佳佳等制備紫杉醇/姜黃素雙載藥脂質體，磷脂濃度40 mg/mL,磷脂-膽固醇比4∶1,藥脂比1∶40,水化介質為pH 6.5的PBS緩沖液。

膽固醇是脂質體制劑中的主要成分之一，對維持脂質體膜結構、穩(wěn)定性等起重要作用。制備脂質體，必須選擇通過關聯(lián)審評，注射級和高純度的膽固醇?，F(xiàn)在膽固醇在脂質體制造中不可少，但即將部分替代或全部替代。已有報道采用與膽固醇結構相似且具一定藥理活性的甾醇、皂苷類化合物替代脂質體處方中膽固醇，同樣能形成性質良好的脂質體。

參考文獻：

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4.中國藥審中心關于脂質體、乳劑注冊申報注意事項文章：審評三部 張寧  注冊分類五中的特殊情況

5.中國藥審中心2004年11月11日兩個腫瘤藥物脂質體品種的專家咨詢會

6. 2020年AVT原輔料產品（供注射用）登記情況

7. AVT：說說藥用輔料中磷脂的發(fā)展歷程是怎樣的？

8.董新電,徐勇智,王禮杰,英成浩,張先南,章根寶. 利用羊毛脂制備膽固醇的方法[P]. 江西?。篊N111171098B,2021-05-07.

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11. 屈曉梅等人，舒馬普坦脂質體的處方與制備工藝優(yōu)化，內蒙古醫(yī)科大學學報. 2021,43(03)

12. 張璐等人，RPV修飾的紫杉醇與五味子乙素脂質體處方工藝優(yōu)化及體外抗腫瘤活性初步評價，中國藥房. 2021,32(10)

13. 王溪淼，錦州醫(yī)科大學，卡培他濱—奧沙利鉑復方脂質體的制備及體外細胞毒性研究

14. 邢宇等人，銀杏內酯B脂質體的處方與制備工藝研究，中國現(xiàn)代應用藥學. 2021,38(06)

15.王成祥等人，鹽酸阿霉素-黃芪甲苷脂質體制備工藝研究，遼寧中醫(yī)藥大學學報. 2021,23(06)

16.呂佳佳等人，紫杉醇/姜黃素雙載藥脂質體的制備工藝及制劑學性質研究，遵義醫(yī)科大學學報. 2020,43(03)

17.陳李霞等人，膽固醇在脂質體中作用及甾醇、皂苷對其替換的研究進展，中草藥，2020年第51卷第24期